Bacteriologische onderzoeksmethode: stadia, doelen, kenmerken
De studie van bacteriën is van groot praktisch belang voor de mens. Tot op heden is een groot aantal prokaryoten ontdekt, die van elkaar verschillen wat betreft pathogeniteit, distributie, vorm, grootte, aantal flagellen en andere parameters. Om deze stam in detail te bestuderen, wordt een bacteriologische onderzoeksmethode gebruikt.
Wat zijn de methoden voor het analyseren van bacteriële cellen?
Om te bepalen of bacteriën pathogeen zijn, wordt cultuur op verschillende manieren uitgevoerd. Onder hen:
1. Bacterioscopische methode.
2. Bacteriologische methode.
3. Biologische methode.
tuberculose microscopie en bacteriologische methoden van onderzoek zijn gebaseerd op het werk van een prokaryote cellen als biologische analyse nodig is om de impact van dergelijke cellen in het levende organisme van proefdieren te onderzoeken. Volgens de mate van manifestatie van deze of andere symptomen van de ziekte wetenschapper kan de aanwezigheid of afwezigheid van pathogene bacteriën in het monster af te leiden, evenals hun natuurlijk voortplanten in het lichaam van het dier voor hun cultuur en gebruiken elders.
De bacteriologische onderzoeksmethode verschilt van de bacterioscopische methode. In de eerste, wordt een speciaal voorbereide cultuur van levende prokaryoten gebruikt voor analyse, wanneer de tweede werkt met dode of levende cellen op een objectglaasje.
Stadia van de bacteriologische onderzoeksmethode. Microbiologie
principe van het bestuderen van de eigenschappen van de bacteriecultuur kan nuttig zijn voor microbiologen, wetenschappers die aan de prokaryote cellen verkennen de diagnose van de patiënt uit te stellen, maar ook voor het laboratorium, die tot taak heeft om de pathogene of niet-pathogene bacteriën vast te stellen, en vervolgens zijn.
De procedure voor het bestuderen van bacteriën is verdeeld in drie fasen:
1. Isolatie van bacteriën uit het oorspronkelijke monster.
2. Zaaien van bacteriën en kweken van pure cultuur, studie van de eigenschappen ervan.
3. Gedetailleerd onderzoek van bacteriële cellen.
Eerste fase van
Een monster of uitstrijkje wordt genomen van een vrij oppervlak van het medium of van de patiënt. Zo krijgen we een "cocktail" van een verscheidenheid aan soorten bacteriën die op een voedingsbodem moeten worden gezaaid. Soms wordt het mogelijk om onmiddellijk de noodzakelijke bacteriën te identificeren, wetende hun foci van verdeling in het lichaam.
Na twee of drie dagen worden de vereiste kolonies geselecteerd en op de vaste media van petrischalen gezaaid met behulp van een steriele lus. Veel laboratoria werken met reageerbuizen, waar een vast of vloeibaar voedingsmedium aanwezig kan zijn. Zo ook de bacteriologische onderzoeksmethode in de microbiologie.
De tweede fase van
Na het verkrijgen van individuele kolonies bacteriën, wordt een directe macro- en microanalyse uitgevoerd. Alle parameters van de kolonies worden gemeten, de kleur en vorm van elk van hen worden bepaald. Het wordt vaak gedaan door kolonies op een petrischaal en vervolgens in het uitgangsmateriaal te tellen. Dit is belangrijk bij de analyse van pathogene bacteriën, waarvan het aantal afhankelijk is van het aantal.
bacteriologische onderzoeksmethode 2 stap die bestaat uit het bestuderen van afzonderlijke kolonies van micro-organismen kan worden gekoppeld met een biologische analysemethode voor bacteriën. Een ander doel van het werk in deze fase is het vergroten van de hoeveelheid bronmateriaal. Het kan op een voedingsmedium gedaan worden en het is mogelijk om een experiment in vivo uit te voeren in levende experimentele organismen. Pathogene bacteriën zullen zich vermenigvuldigen en als gevolg daarvan zal het bloed miljoenen prokaryotische cellen bevatten. Uit het bloed dat wordt afgenomen, is het gemakkelijk om het benodigde werkmateriaal van bacteriën te bereiden.
derde fase
Het belangrijkste onderdeel van de studie - de definitie van morfologische, biochemische, toxigene en antigene eigenschappen van de bacterie cultuur. Werk wordt gedaan met eerder "gezuiverde" gewassen op een voedingsbodem, evenals met preparaten( vaak gekleurd) onder een microscoop.
Set lidmaatschap van pathogene of opportunistische bacteriën aan een bepaalde taxonomische groep, evenals hun resistentie tegen geneesmiddelen te bepalen laat bacteriologisch onderzoek methode. Stadium 3 - antibiotica, d.w.z. analyse van het gedrag van bacteriële cellen in aandoeningen van geneesmiddelen in het milieu.
Een onderzoek naar de resistentie van een cultuur tegen een antibioticum is van groot praktisch belang wanneer het noodzakelijk is om voor een bepaalde patiënt de noodzakelijke en vooral effectieve geneesmiddelen voor te schrijven. Hier en de bacteriologische onderzoeksmethode kan helpen.
Wat is een cultuurmedium?
Voor ontwikkeling en reproductie moeten bacteriën zich in vooraf bereide voedingsmedia bevinden. Door hun consistentie kunnen ze vloeibaar of vast zijn en van oorsprong - plantaardig of dierlijk.
Basisvereisten voor voedingsmedia:
1. Steriliteit.
2. Maximale transparantie.
3. Optimale parameters van zuurgraad, osmotische druk, wateractiviteit en andere biologische grootheden.
Afzonderlijke kolonies van
verkrijgen 1. De methode van Drigalsky. Het bestaat uit het aanbrengen van een uitstrijkje met verschillende soorten micro-organismen op de bacteriële lus. Deze lus wordt uitgevoerd op de eerste petrischaal met voedingsmedium. Verder, zonder de lus te veranderen, wordt de werkwijze van restmateriaal uitgevoerd op de tweede en derde platen van Petri. Dus, op de laatste monsters van de kolonie, zullen bacteriën niet te strak worden gezaaid, waardoor de mogelijkheid wordt vereenvoudigd om de bacteriën te vinden die nodig zijn voor werk.
2. De Koch-methode. Het maakt gebruik van buizen met gesmolten voedingsmedium. Er wordt een lus of pipet met een bacterieuitsteeksel geplaatst, waarna de inhoud van de buis op een speciale plaat wordt gegoten. Agar( of gelatine) bevriest na een tijdje, en in zijn dikte is het gemakkelijk om de nodige kolonies cellen te vinden. Het is belangrijk voordat het mengsel van bacteriën in reageerbuizen begint te verdunnen, zodat de concentratie van micro-organismen niet erg groot is.
De bacteriologische onderzoeksmethode, waarvan de stadia gebaseerd zijn op de isolatie van de gewenste bacteriecultuur, doet niet zonder deze twee methoden om geïsoleerde kolonies te vinden.
Antibioticogram
Visueel is de reactie van bacteriën op geneesmiddelen op twee praktische manieren te zien:
1. Methode van papieren schijven.
2. Fokken van bacteriën en antibioticum in een vloeibaar medium.
De papierschijfmethode vereist een kweek van micro-organismen die zijn gekweekt op een vast voedingsmedium. Op dit medium worden verschillende rondvormige papieren geplaatst, geïmpregneerd met antibiotica. Als het medicijn met succes de neutralisatie van bacteriële cellen aanpakt, blijft zo'n behandeling verstoken van kolonies. Als de reactie op het antibioticum negatief is, zullen de bacteriën overleven.
In het geval van het gebruik van een vloeibaar voedingsmedium, worden eerst verschillende buizen met een kweek van bacteriën met verschillende verdunningsgraden bereid. Antibiotica worden aan deze buizen toegevoegd en gedurende de dag observeren ze het proces van interactie van de substantie en micro-organismen. Uiteindelijk wordt een kwalitatief antibioticogram verkregen, waaruit men de effectiviteit van het medicijn voor een bepaalde cultuur kan beoordelen.
De belangrijkste taken van de
-analyse Hier zijn de doelen en stadia van de bacteriologische onderzoeksmethode.
1. Verkrijg het bronmateriaal dat gebruikt zal worden om bacteriekolonies te isoleren. Het kan een uitstrijkje zijn vanaf het oppervlak van een voorwerp, slijmvliezen of holte van het menselijk lichaam, een bloedtest.
2. Teelt van cultuur op een vast voedingsmedium. Na 24-48 uur op een petrischaal, kun je kolonies van bacteriën van verschillende soorten vinden. We selecteren de vereiste morfologische en / of biochemische criteria en werken er verder mee verder.
3. Reproductie van de verkregen cultuur. De bacteriologische onderzoeksmethode kan gebaseerd zijn op een mechanische of biologische methode om het aantal bacterieculturen te verhogen. In het eerste geval wordt gewerkt met vaste of vloeibare voedingsmedia waarop de bacteriën zich vermenigvuldigen in een thermostaat en nieuwe kolonies vormen. De biologische methode vereist natuurlijke omstandigheden voor het verhogen van het aantal bacteriën, dus een proefdier wordt hier geïnfecteerd met micro-organismen. Een paar dagen later zijn er veel prokaryoten in een bloedmonster of uitstrijkje.
4. Werk met een gezuiverde cultuur. Om de systematische positie van bacteriën te bepalen, evenals hun aanwezigheid bij pathogenen, is het noodzakelijk om een grondige analyse van de cellen uit te voeren volgens morfologische en biochemische kenmerken. Bij het onderzoeken van pathogene groepen micro-organismen, is het belangrijk om te weten hoe effectief de werking van antibiotica is.
Dit was een algemeen kenmerk van de bacteriologische onderzoeksmethode.
Kenmerken van de analyse
De hoofdregel voor het uitvoeren van bacteriologisch onderzoek is maximale steriliteit. Als er met reageerbuizen wordt gewerkt, moeten kweken en transplantaties van bacteriën alleen in een verwarmde geest worden uitgevoerd.
Alle stadia van de bacteriologische onderzoeksmethode vereisen het gebruik van een speciale lus of een Pasteur-pipet. Beide instrumenten moeten worden voorbehandeld in de vlam van de geestlamp. Wat betreft de Pasteur-pipet, dan moet vóór thermische sterilisatie de punt van de pipet met een pincet worden gebroken.
Techniek van zaaicellen heeft ook zijn eigen kenmerken. Ten eerste, voer bij het zaaien op vaste media een bacteriële lus uit over het oppervlak van de agar. De lus zou natuurlijk al een monster van micro-organismen op het oppervlak moeten hebben. Het is ook in de praktijk om in het kweekmedium te zaaien, in welk geval de lus of pipet de bodem van de petrischaal moet bereiken.
Bij het werken met vloeibare media worden buizen gebruikt. Het is belangrijk om ervoor te zorgen dat vloeistoffen de randen van het laboratoriumglaswerk of de kurk niet raken en dat de gebruikte instrumenten( pipet, lus) geen vreemde voorwerpen en oppervlakken raken.
Het belang van de biologische onderzoeksmethode
De analyse van een bacterie-monster heeft zijn praktische toepassing. Allereerst kan de bacteriologische onderzoeksmethode worden gebruikt in de geneeskunde. Het is bijvoorbeeld noodzakelijk om de microflora van de patiënt te bestuderen om de juiste diagnose te stellen en om ook de juiste behandelingsmethode uit te werken. Hier helpt het antibioticogram, dat de activiteit van geneesmiddelen tegen de veroorzaker van ziekten zal aantonen.
Bacteriële analyse wordt in het laboratorium gebruikt om gevaarlijke ziektes te identificeren, zoals tuberculose, terugkerende tyfus of gonorroe. Het wordt ook gebruikt om de bacteriële samenstelling van amandelen, holten van organen te bestuderen.
De bacteriologische onderzoeksmethode kan worden gebruikt om de besmetting van het milieu te bepalen. Volgens de kwantitatieve en kwalitatieve samenstelling van het uitstrijkje vanaf het oppervlak van een object, wordt de mate van populatie van dit medium bepaald door micro-organismen.